...................................................................................................................................... 4 LISTA DE FIGURAS ............................................................................................................................ 6 1. INTRODUÇÃO ........................................................................................................................... 9 2. REVISÃO BIBLIOGRÁFICA ........................................................................................................ 10 2.1. Déficit hídrico e seus efeitos na planta ....................................................................... 10 2.2. O amendoim silvestre como fonte de alelos de tolerância à seca .............................. 11 2.3. Dehidrina ..................................................................................................................... 12 2.4. ascorbato peroxidase, galactinol sintase e DREB ........................................................... 13 2.5. Arabidopsis como planta-modelo para transformação genética ...................................... 14 3. JUSTIFICATIVA ....................................................................................................................... 15 4. HIPÓTESES ............................................................................................................................ 15 5. OBJETIVOS ............................................................................................................................ 15 6. MATERIAL E MÉTODOS ........................................................................................................... 16 6.1. Local de realização dos experimentos ............................................................................. 16 6.2. Caracterização do AdDHN ............................................................................................... 16 6.3. Clonagem do AdDHN no vetor binário pPZP ................................................................... 17 6.5. Transformação e seleção de gerações T1 e T2 de linhagens transgênicas de Arabidopsis thaliana ................................................................................................................ 18 6.6. Caracterização molecular de linhagens transgênicas T1 de A. thaliana ......................... 20 6.7. Análise de expressão de genes relacionados à dehidrina ............................................... 21 6.8. Ensaios de frio e calor ...................................................................................................... 21 6.9. Ensaio de déficit hídrico ................................................................................................... 22 6.10. Análise da área foliar ...................................................................................................... 23 6.11. Conteúdo relativo de água nas folhas ............................................................................ 23 6.12. Quantificação de açúcares solúveis totais (AST)........................................................... 23 7. RESULTADOS ......................................................................................................................... 23 7.1. Caracterização do gene dehidrina do Arachis duranensis .............................................. 23 7.2. Transformação do vetor binário em linhagem desarmada A. tumefaciens GV 3101 ...... 24 7.3. Transformação de A. thaliana e seleção das gerações T0 até T2 .................................. 25 7.4. Seleção de linhagens T2 em homozigose ....................................................................... 26 7.5. Análises moleculares das plantas transgênicas em geração T2 ..................................... 28 7.6. Ensaios de baixa e alta temperatura, NaCl e manitol ...................................................... 31 7.6.1. Análise da taxa de sobrevivência das plântulas ....................................................... 31 7.6.2. Análise do teor de açúcares solúveis totais .............................................................. 32 7.7. Ensaio de déficit hídrico gradual ...................................................................................... 33 7.7.1. Análise do fenótipo e da área foliar das plantas submetidas a seca ........................ 33 7.7.2. Análise do teor relativo de água ................................................................................ 35 7.8. Expressão relativa de ascorbato peroxidase, galactinol sintase e DREB em plantas transgênicas de A. thaliana ..................................................................................................... 36 8. DISCUSSÃO ........................................................................................................................... 39 8.1. Caracterização molecular de AdDHN .............................................................................. 39 8.2. Obtenção e caracterização de plantas transgênicas de A. thaliana expressando AdDHN ................................................................................................................................................. 40 8.3. Efeito da superexpressão de AdDHN na resposta ao frio e ao calor .............................. 41 8.4. Efeito da superexpressão de AdDHN na resposta ao déficit hídrico ............................... 42 8.5. Análise da expressão de ascorbato peroxidase, galactinol sintase e DREB em plantas transgênicas superexpressando AdDHN ................................................................................ 44 9. CONCLUSÃO .......................................................................................................................... 46 10. PERSPECTIVAS .................................................................................................................. 47 11. REFERÊNCIAS BIBLIOGRÁFICAS ........................................................................................... 48 12. APÊNDICES........................................................................................................................ 53