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Glutathione reductase:CCnc:Pt:RBC:Qn

Known as: Glutationa redutase:CCnc:Pt:Eritroc:Qn, GR RBC-cCnc, Glutatyon redüktaz:KtlKons:Zml?:Eritrosit:Kant 
 
National Institutes of Health

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2014
2014
.............................................................................................................................................. X 3 – OBJETIVOS ....................................................................................................................................... 26 3.1 – OBJETIVO GERAL ........................................................................................................................... 27 3.2 – OBJETIVOS ESPECÍFICOS ................................................................................................................ 27 3.2.1 In vitro: ................................................................................................................................... 27 3.2.2 In vivo: .................................................................................................................................... 27 4 – MATERIAL E MÉTODOS ............................................................................................................... 28 4.1 REAGENTES ...................................................................................................................................... 29 4.2 ANIMAIS ........................................................................................................................................... 29 4.3 – COLETA DO MATERIAL BOTÂNICO ..................................................................................................... 29 4.4 – PREPARAÇÃO DO EXTRATO ............................................................................................................... 29 4.5 – ENSAIO “IN VITRO” ......................................................................................................................... 30 4.5.1 – COMPOSIÇÃO QUÍMICA DO EXTRATO DETERMINADA POR HPLC ..................................................... 30 4.5.2 – TOXICIDADE EM CULTURA DE CÉLULAS HEPÁTICAS HEPG2 .......................................................... 30 4.5.2.1 – CULTURA DE CÉLULAS ............................................................................................................... 30 4.5.2.2 – ENSAIO DE TOXICIDADE COM MTT ............................................................................................ 31 4.5.3 – CAPACIDADE EM SEQUESTRAR O RADICAL DPPH• ......................................................................... 31 4.6 – ENSAIO “IN VIVO” ........................................................................................................................... 32 4.6.1 – AVALIAÇÃO DA INJÚRIA HEPÁTICA INDUZIDA POR APAP ................................................................ 32 4.6.2 – DELINEAMENTO EXPERIMENTAL ................................................................................................... 32 4.6.3 – ISOLAMENTO DE LEUCÓCITOS POLIMORFONUCLEARES ................................................................... 33 4.6.4 – AVALIAÇÃO DA VIABILIDADE CELULAR ........................................................................................... 34 4.6.5 – DOSAGEM DE ÓXIDO NÍTRICO ....................................................................................................... 34 4.6.6 – ATIVIDADE DA SUPERÓXIDO DISMUTASE ........................................................................................ 34 4.6.7 – ATIVIDADE DA CATALASE .............................................................................................................. 35 Pádua, B. C. Sumário xii 4.6.8 – PREPARAÇÃO DO TECIDO HEPÁTICO .............................................................................................. 35 4.6.9 – ANÁLISE DOS MARCADORES DO ESTRESSE OXIDATIVO EM TECIDO HEPÁTICO ................................... 36 4.6.9.1 – PROTEÍNA CARBONILADA ........................................................................................................... 36 4.6.9.2 – NÍVEIS DE TBARS ..................................................................................................................... 37 4.6.10 – ANÁLISE DAS DEFESAS ANTIOXIDANTES EM TECIDO HEPÁTICO ...................................................... 37 4.6.10.1 – ATIVIDADE DA SUPERÓXIDO DISMUTASE (SOD) ........................................................................ 37 4.6.10.2 – ATIVIDADE DA CATALASE ......................................................................................................... 38 4.6.10.3 – GLUTATIONA TOTAL, OXIDADA E REDUZIDA .............................................................................. 38 4.6.10.4 – ATIVIDADE DA GLUTATIONA PEROXIDASE (GPX) ...................................................................... 39 4.6.10.5 – ATIVIDADE DA GLUTATIONA REDUTASE (GR) ........................................................................... 40 4.6.11 – PROTEÍNAS TOTAIS ...................................................................................................................... 41 4.6.12 – ENSAIO DE RT-PCR QUANTITATIVA EM TEMPO REAL ................................................................... 42 4.6.12.1 – EXTRAÇÃO DO RNA TOTAL DE NEUTRÓFILOS ............................................................................ 42 4.6.12.2 – EXTRAÇÃO DO RNA TOTAL DE CÉLULAS HEPÁTICAS .................................................................. 43 4.6.12.3 – SÍNTESE DO CDNA .................................................................................................................. 43 4.6.12.4 – DESENHO DOS OLIGONUCLEOTÍDEOS INICIADORES ................................................................... 44 4.6.12.5 – CURVA DE EFICIÊNCIA DOS OLIGONUCLEOTÍDEOS INICIADORES ................................................ 44 4.6.12.6 – RT-PCR QUANTITATIVA EM TEMPO REAL .................................................................................. 44 4.6.13 – AVALIAÇÃO HISTOLÓGICA ............................................................................................................ 45 4.7 – ANÁLISE ESTATÍSTICA ...................................................................................................................... 46 5 RESULTADOS .................................................................................................................................... 47 6 DISCUSSÃO ........................................................................................................................................ 62 7 CONCLUSÃO ..................................................................................................................................... 73 8 – REFERÊNCIAS BIBLIOGRÁFICAS.............................................................................................. 75 9 ANEXOS .............................................................................................................................................. 93 ANEXO I – PROTOCOLOS DAS DOSAGENS BIOQUÍMICAS ......................................................................... 94 I.1 Alanina Aminotransferase .......................................................................................................... 94 I.2 Aspartato Aminotransferase ....................................................................................................... 95 ANEXO II – TRABALHO PUBLICADO ........................................................................................................ 97 ANEXO III – TRABALHO SUBMETIDO À PUBLICAÇÃO .............................................................................. 98 ANEXO IV – RESUMOS PUBLICADOS EM ANAIS DE CONGRESSOS ............................................................ 99 Pádua, B. C. Lista de Tabelas xiii LISTA DE TABELAS Tabela I Antioxidantes de baixo peso molecular e seus principais alvos. Tabela II – Viabilidade e toxicidade do extrato hidroalcoólico de B. trimera sobre células hepáticas (HEP G2). Os dados estão expressos em porcentagem. A linhagem de células GEP G2 foi incubada na ausência de B. trimera, enquanto que a linhagem Hep G2+Bt corresponde a cultura de células incubadas com extrato de B. trimera. Tabela III – Percentual de inibição do radical DPPH• por diferentes concentrações do extrato de B. trimera e do antioxidante de referência Trolox, em 30 e 60 minutos. Pádua, B. C. Lista de Figuras xiv LISTA DE FIGURAS Figura 1 – Esquema de lóbulo hepático. Figura 2 – Metabolização hepática do paracetamol. Figura 3: Complexo NADPH oxidase. Figura 4 Formação do óxido nítrico a partir da L-arginina. Figura 5 Formação de espécies reativas e ação de enzimas antioxidantes. Figura 6 – Foto da espécie de Baccharis trimera. Figura 7: Estrutura geral dos flavonóides. Figura 8 – Indução da transcrição gênica de enzimas antioxidantes por polifenóis, através da ativação do Elemento de Resposta Antioxidante (ARE) mediada fator de transcrição Nrf2. Figura 9 – Delineamento experimental. Figura 10 – (A) Cromatografia de amostras de B. trimera preparadas para administração em animais experimentais; (B) Espectro UV de picos eluídos em 3.13 minutos; (C) Espectro UV de picos eluídos em minutos 4.36; (D) Espectro UV de picos eluídos em 4.63 minutos (E) Espectro UV de picos eluídos em 11.84 minutes; (F) Espectro UV de picos eluídos em 22.60 minutos. Figura 11 – (A e B) Cromatografia HPLC-DAD, monitorado em 254 nm e espectro de absorção de UV da quercetina; (C e D) Cromatografia HPLC-DAD, monitorado em 254 nm e espectro de absorção de UV da rutina. Figura 12 – Hepatoxicidade do APAP em ratos Fischer. A atividade sérica de ALT e AST foram medidas nos tempos indicados após uma dose única de APAP (835 mg/kg). Figura 13 – Efeito do extrato de B. trimera sobre a expressão gênica das subunidades da NADPH oxidase em neutrófilos de ratos 24 h após a intoxicação com APAP. Figura 14 – Efeito do extrato de B. trimera sobre a produção de NO (A) e sobre a expressão do gene da iNOS (B) em neutrófilos de ratos 24 h após a intoxicação com APAP. Figura 15 – Efeito do extrato de B. tr 
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2013
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La Ribonucleotidil Reductasa (RNR) es un enzim essencial encarregat de reduir els ribonucleotids (NTP) als seus corresponents… Expand
  • figure 3
  • table 1
  • figure 7
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2005
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