........................................................................................................................................... 11 1 INTRODUÇÃO .................................................................................................................................... 12 1.2 Proteínas de M. corti como potenciais marcadores moleculares do desenvolvimento de cestódeos .......................................................................................................................................... 14 1.3 Uma proteína cromodomínio-helicase (CHD) como potencial marcador de desenvolvimento de M. corti .............................................................................................................................................. 16 1.4 Justificativa e objetivos ............................................................................................................... 18 1.4.1 Objetivo geral ........................................................................................................................... 18 1.4.2 Objetivos específicos ................................................................................................................ 19 2 MATERIAIS E MÉTODOS ................................................................................................................... 20 2.1 Manipulação in vivo e in vitro de M. corti ................................................................................... 20 2.1.1 Manipulação in vivo ................................................................................................................. 20 2.1.2 Manipulação in vitro ................................................................................................................ 20 2.1.3 Indução da estrobilização de tetratirídeos ............................................................................... 21 2.1.4 Preparação de extratos proteicos ............................................................................................ 21 2.2 Clonagem da sequência codificadora parcial da proteína McCHD de M. corti .......................... 21 2.2.1 Seleção da sequência alvo ....................................................................................................... 21 2.2.2 Projeto de oligonucleotídeos iniciadores ................................................................................. 22 2.2.3 Obtenção e amplificação da sequência parcial da proteína recMcCHD .................................. 22 2.2.5 Realização da clonagem por recombinação in vivo ................................................................. 23 2.3 Expressão da proteína recombinante ......................................................................................... 24 2.3.1 Solubilização da proteína recombinante .................................................................................. 24 2.3.2 Purificação da proteína recombinante recMcCHD ................................................................... 25 2.4 Produção de antissoro policlonal monoespecífico ...................................................................... 25 2.5 Imunoblot .................................................................................................................................... 25 2.6 Análise eletroforética em gel de agarose e gel de poliacrilamida .............................................. 26 3 RESULTADOS ..................................................................................................................................... 27 3.1 Obtenção e amplificação da sequência parcial da proteína recMcCHD ..................................... 27 3.1.1 Extração de RNA de tetratirídeos de M. corti .......................................................................... 27 3.1.2 Amplificação da sequência codificadora da proteína recMcCHD ............................................ 27 3.2 Clonagem da sequência-alvo por recombinação in vivo ............................................................. 28 3.2.1 Preparação do vetor................................................................................................................. 28 3.2.2 Clonagem por recombinação in vivo ........................................................................................ 29 3.3 Expressão da proteína recMcCHD em E. coli ............................................................................... 30 3.3.1 Solubilização da proteína recMcCHD ....................................................................................... 31 3.3.2 Purificação da proteína recMcCHD .......................................................................................... 32 3.4 Análise da expressão da proteína McCHD em extratos proteicos de M. corti ............................ 32 4 DISCUSSÃO ....................................................................................................................................... 34 5 REFERÊNCIAS BIBLIOGRÁFICAS ......................................................................................................... 38